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以突变Tomlinson I库中筛选的抗细胞黏附分子L1的胞外区单链抗体为例, 对定点突变和随机突变两种构建噬菌体抗体次级库的方法进行比较。方法 设计定点突变和随机PCR引物在基因水平经PCR、酶切、连接将已有噬菌粒引入突变后转染大肠杆菌构建噬菌体次级抗体库; 之后使用噬菌体ELISA确定阳性单克隆比例, 采用皮尔森χ2检验进行比较。结果 两种方法构建的次级抗体库库容分别为1.4×106 pfu/...
实时荧光定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用
实时荧光定量 PCR检测RAW264.7 巨噬细胞 Th1/Th2型细胞因子 转录水平方法 初步应用
2013/4/17
建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量PCR检测方法。方法 依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、 Th1型及Th2 型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物, 以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板, 通过构建质粒阳性标准品, 建立检测上述细胞因子转录水平的real-time PCR方法。结果 用建立的荧光定量PCR方法, 检测牛型布鲁氏菌...
实时定量PCR评价小鼠胸腺功能方法的建立
2007/7/25
胸腺是T细胞发育、分化、成熟，并将幼稚T细胞向外周T细胞库输出的场所。T淋巴细胞负责细胞免疫，起免疫监视和免疫自稳的作用。因此胸腺的免疫功能在抗衰老、抗感染、抗肿瘤及自身免疫性疾病中起着重要作用[1]。目前许多研究者致力于胸腺功能方面的研究，期望提高个体免疫力，并有效的抵抗衰老。因而对于胸腺功能的真实评价显得尤为重要。自从1998年Douek[2]等首次使用信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs...